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基因芯片技术服务 DNA甲基化芯片 DNA羟甲基化芯片 ChIP-chip |
NGS测序技术服务 DNA甲基化测序 DNA羟甲基化测序 染色质免疫共沉淀测序 |
PCR技术服务 MeDIP-qPCR hMeDIP-qPCR ChIP-qPCR |
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蛋白相对定量 TMT标记定量技术 非标定量技术 |
蛋白修饰 TMT标记定量磷酸化 非标定量磷酸化 |
RNA/蛋白-蛋白相互作用 RNA-蛋白相互作用 蛋白-蛋白相互作用 |
康成生物提供ChIP-qPCR服务，能够检测特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子区域的结合；在已知启动子范围内寻找特定转录因子/组蛋白修饰的结合位点。
ChIP-qPCR完美结合了ChIP技术和实时定量PCR技术。ChIP技术利用抗体特异性富集与特定转录因子/组蛋白修饰结合的DNA片段；qPCR技术使用SYBR荧光染料，非特异性的掺入DNA双链，发射荧光，保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，最后利用Ct值进行定量分析。ChIP-qPCR能够专一，灵敏，快速，高重复地定量生物样品中特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子的结合。
● 高特异性，针对感兴趣的基因启动子设计特异性的实时荧光定量PCR引物；
● 超宽的线性范围，可跨越7个数量级；
● 精确度高，重复性好；
● 灵敏度高
实验流程
A. 样品交联，甲醛处理细胞，交联DNA与DNA结合蛋白
B. 超声打断染色质，裂解细胞，并以超声波将染色质打断成400-500bp的片段
C. 染色质免疫共沉淀，将B所得片段分成两份，一份与特异性抗体进行免疫共沉淀(ChIP)，另一份作为Total input样品
D. DNA纯化，将C所得两份蛋白-DNA复合物解交联，纯化分离DNA片段。ChIP富集的DNA片段(ChIP DNA)，Total input样品中的DNA片段(Total input DNA)
E. 实时荧光定量PCR检测
数据处理
● Total input DNA样品作为模板，用待测基因特异性引物进行qPCR，检测得到Ct值(Input)
● ChIP DNA样品作为模板，用待测基因特异性引物进行qPCR，检测得到Ct值(ChIP)
● 待测基因免疫共沉淀的效率(ChIP / Total input)可通过以下公式计算：
%(ChIP / Total input) = 2^[ Ct (Input)- Ct (ChIP) ] * 100
